药物杂质的检测方法全解析

药品杂质作为影响药品安全有效性的关键因素，在药品研究、质控过程中发挥了重要作用。目前，药物杂质已成为国内外药品监管机构的重点关注内容之一。

检查药物中存在的微量杂质，首要的问题就是要选择一个专属性强的方法，使药物对含微量杂质的检测也不产生干扰。所以药物中杂质的检查主要是依据药物与杂质在物理或化学性质上的差异来进行。

药物与杂质在物理性质上的差异，主要指药物与杂质在外观分配或吸附以及对光的吸收等性质的差别；在化学性质上的差异，主要指药物与杂质对某化学反应的差别，一般地，是杂质与试剂反应，而药物不反应。根据杂质的控制要求，可以进行量检查，也可以对杂质进行定量测定。

药物中杂质的检测方法包括化学法、光谱法、色谱法等，因药物结构及杂质的不同采用不同的检测方法。杂质检查常用的方法包括：化学方法、色谱方法、光谱方法和物理方法等；有机杂质的检测方法多采用色谱法，特别是HPLC法。

一、化学方法

当药物中杂质与药物的化学性质相差较大时,可选择合适的试剂，使之与杂质发生化学反应，产生颜色、沉淀或气体，从而检查杂质的限量。采用化学检査法除了对杂质进行半定量检查外，还可采用滴定法和重量法对杂质进行定量测定。

1、显色反应检查法 

当杂质与试剂产生颜色时,采用比色法控制杂质的限量，多为目视比色。

2、沉淀反应检查法 

当杂质与试剂产生沉淀时,采用比浊法控制杂质的限量故可以采用重量法测定杂质的量。

3、生成气体的检查法

当杂质与试剂反应产生气体时,采用相应的气体检查法来控制杂质的限量。

4、滴定法

滴定剂只与杂质反应，以一定浓度的滴定液滴定药物中的杂质，可以定量地测定杂质的含量。

二、色谱方法

药物中的有机杂质，可能是已知的或未知的、挥发性的或不挥发性的，其结构和性质往往和药物相近。如果药物和杂质与某些试剂的反应相同或相似，或者它们的光谱特征相似，这时就难以采用化学法和光谱法对杂质进行检查。

由于色谱法可以利用药物与杂质的色谱性质的差异，能有效地将杂质与药物进行分离和检测，因而色谱法广泛应用于药物中杂质的检查。

药物中的有关物质包括起始原料、中间体、副产物、异构体、聚合体和降解产物等，它们的化学结构常常与药物类似或具有渊源关系。色谱法是有关物质检查的首选方法。

1、薄层色谱法 

TLC被许多国家药典用于药物中杂质的检查，具有设备简单、操作简便、分离速度快、灵敏度和分辨率较高等优点。 

常用的方法有：杂质对照品法、供试品溶液的自身稀释对照法、或两法并用法、以及对照药物法。质量标准中应规定杂质的个数和限度。

杂质对照品法：适用于已知杂质并能制备杂质对照品的情况。

方法：根据杂质限量，取供试品溶液和一定浓度的杂质对照品溶液，分别点样于同一薄层板上，展开、斑点定位。供试品溶液除主斑点外的其他斑点与相应的杂质对照品溶液或系列浓度杂质对照品溶液的相应主斑点进行比较。判断药物中杂质限量是否合格。

2、高效液相色谱法 

高效液相色谱法分离效能高、专属性强和检测灵敏性好，可以准确地测定各组分的峰面积，在杂质检查中的应用日益增多。对于使用高效液相色谱法测定含量的药物，可采用同一色谱条件进行杂质检查。

检测杂质有四种方法：外标法(杂质对照品法)加校正因子的主成分自身对照测定法、不加校正因子的主成分自身对照法、面积归一化法。

3、气相色谱法 

气相色谱法用来测定药物中挥发性特殊杂质，特别是药物中的残留溶剂的记检查，各国药典均规定采用气相色谱法。

方法：除了有与高效液相色谱法相同的杂质检查方法外，还有“标准溶液加入法”，将一定量的杂质对照品溶液精密加入到供试品溶液中，根据外标法或内标法测定杂质的含量，再扣除加积入的对照品溶液含量，即得供试品溶液中杂质的含量。 

4、毛细管电泳法 

毛细管电泳法可以用于多肽、酶类等药物中杂质的检查。检查方法与高效液相色谱法相同。

三、光谱方法

光谱法依据药物和其杂质对光的选择性吸收差异进行杂质的限度检查。

1、紫外-可见分光光度法 

利用药物与杂质的紫外-可见吸收特征的差异进行检查。如果药物在杂质的最大吸收波长处没有吸收，则可在此波长处测定样品溶液的吸光度，通过控制样品溶液的吸光度或透光率来控制杂质的含量。也可利用杂质与试剂发生呈色反应,在可见光区，测定杂质的含量。

2、红外分光光度法 

某些多晶型药物，由于晶型状态的不同，一些化学分子间非共价键作用的键长、键角等发生不同程度的变化，从而导致红外吸收光谱中某些特征峰的频率、峰形和强度出现特征的差异。利用红外分光光度法对这些差异进行定量测定,可以检查药物中特定的晶型杂质(低效、无效,或影响质量与稳定性)。方法简便，结果可靠。

3、原子吸收分光光度法 

原子吸收分光光度法是一种灵敏度很高的测定方法，广泛用于微量金属元素的分析。在杂质检查中，主要是用于药物中重金属杂质的检查。

通常采用标准加入法控制重金属杂质的限量：取供试品,按各品种项下的规定，制备供试品溶液：另取等量的供试品，加人限度量的待测元素溶液,制成对照溶液。设对照溶液的读数为a，供试品溶液的读数为b，b值应小于(a-b)。例如维生素C中铁盐和铜盐的检查。

四、其他方法

热分析(thermal analysis) 是在程序控制温度条件下，精确记录物质的物理化学性质随温度变化的关系，研究物质在受热过程中所发生的晶型转化、熔融、蒸发、脱水等物理变化,或热分解、氧化、还原等化学变化，以及伴随发生的温度、能量或重量改变的方法。常用的热分析法有热重分析(TG)和差示扫描量热分析(DSC)。

热分析法检查药物纯度注意事项：

① 供试品纯度在98.0%以上;

② 杂质不与主成分反应;

③ 杂质不与主成分形成共晶或固熔体;

④ 杂质与熔融试样有化学相似性;

⑤ 药物在熔融过程中化学性稳定;

⑥ 药物如存在多晶现象则必须全部转变成某一晶型。

 

利用范特霍夫方程测定纯度时，是建立在杂质不形成固溶体的假设之上的，所以本法的应用具有一定的局限性，特别是当供试品为混晶物质(即不同晶型的混合物熔点值无差异)或熔融时分解的物质，则难以准确地测定其化学或晶型纯度。

 

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